设计采用一个或两个共刺激信号域，提高了体内转染T细胞的作用范围和持久性。第四代“装甲”CAR-T细胞额外表达细胞因子或共刺激配体，其目的是增强CAR-T细胞的扩增和寿命[14]。CAR-T细胞可识别肿瘤相关抗原，清除肿瘤细胞不受MHC的限制。最新的研究发现了一种新型CAR-T结构，使常规CAR-T可以表达白细胞介素-7（IL-7）和CCL19两种趋化因子，IL-7能够促进T细胞存活和增殖，CCL19能够促进T细胞迁移，这种新型7×19 CAR-T可以有效增强CAR-T以及机体自身T细胞的抗实体瘤活性，对于常规CAR-T几乎无效的实体瘤，这种新一代CAR-T也能实现肿瘤的完全消除[15]。这一研究显示[15]，CAR-T细胞不仅可以直接发挥抗癌作用，也可以作为细胞载体，将免疫调节分子传递到肿瘤微环境，从而在体内触发、增强和维持抗肿瘤免疫反應。
选择一个合适的CAR-T细胞抗原是免疫治疗获得成功的不可或缺的条件。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican 3，GPC3）在HCC组织细胞膜和细胞浆均有表达，在癌旁组织不表达或低表达，且与不良预后相关[16]。Jiang等[17]利用HCC患者的肿瘤组织，建立了小鼠移植瘤模型，采用靶向GPC3的CAR-T细胞治疗后发现，高表达GPC3的移植瘤都被根除，而GPC3表达水平相对较低的肿瘤生长得到有效抑制，提示靶向GPC3的CAR-T细胞可以有效消除GPC3阳性HCC细胞。甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）在HCC中高表达，被认为是另一种潜在的TAA，AFP会在细胞内被降解为肽段，并由MHC Ⅰ类抗原递呈到肿瘤细胞表面。Liu等[18]根据这一特性，开发出新型CAR结构，ET1402L1-CAR（AFP-CAR），这种CAR可以识别AFP-MHC复合物，能够有效抑制HCC移植瘤生长。最新的一项Ⅰ期临床研究，应用了靶向CD133的CAR-T细胞（CART-133），发现应用CART-133治疗CD133阳性和晚期转移的HCC患者稳定生存时间延长，部分患者疾病得到缓解[19]。这些发现为CAR-T细胞治疗的靶向抗原选择提供了新的思路。脱靶效应是CAR-T治疗的缺点之一，最新的研究发现，敲除CAR-T细胞的程序性死亡受体1（programmed cell death protein 1，PD-1）基因，能够增强CAR-T细胞的抗HCC作用，这一研究提示，未来可以将CAR-T细胞与免疫检查点阻断相结合，提高CAR-T治疗的有效性[20]。
虽然现在已经有很多关于CAR-T细胞治疗HCC的临床试验（表1），但是到目前为止大多数都尚未完成，CAR-T细胞在HCC治疗方面还面临着巨大的挑战，其局限性包括缺乏合适的TAA、细胞因子风暴、T细胞归巢效率低下、无法区分表达相应抗原的肿瘤细胞和正常细胞、免疫逃逸造成的脱靶效应、长期安全性未知等，有待进一步研究。
2.3.2 TCR-T细胞治疗 T细胞受体修饰的T细胞（T cell receptor-modified T cells，TCR-T），是利用基因工程技术，将针对肿瘤特异性抗原的受体导入T细胞，然后回输到患者体内，使患者T细胞表达抗原特异性TCR，从而发挥效应T细胞功能，这种TCR-T细胞能够表达肿瘤特异性抗原受体，因而能够特异性的识别靶细胞[21]。
Spear等[22]构建了一种HCV1406 TCR-T细胞，这种TCR-T细胞能够使HCV阳性的HCC肿瘤消退，提示HCV TCR-T细胞可能是治疗HCV阳性HCC肿瘤的一种有效疗法。最新的研究发现了一种新的靶向AFP的TCR-T细胞，这种细胞特异性识别HLA-A2+AFP+HepG2细胞并产生效应细胞因子，而且对体外培养的正常原代肝细胞没有明显毒性，用这种AFP特异性TCR-T细胞治疗可以根除NSG小鼠中的HepG2移植瘤[23]。这些研究均显示，TCR-T细胞在HCC治疗中有巨大的潜力，相关的临床试验也正在进行。见表1。
TCR-T细胞治疗也存在许多问题，可能造成脱靶效应、细胞因子风暴等，因此，如何有针对性地对TCR-T细胞进行改造，使其更加安全有效地发挥抗肿瘤活性，是需要进一步研究的问题。
3 结语
免疫细胞治疗作为新型的治疗手段，在HCC治疗中发挥了巨大的潜力，将其与其他治疗手段如肝切除术、肿瘤消融术、肝动脉化疗栓塞术等联合应用，可以提高疗效，改善机体的免疫功能，对于应用其他治疗手段无效的患者，可以选择免疫细胞治疗来增强疗效。基因修饰的HCC特异性免疫细胞治疗作为最新的免疫细胞疗法，在HCC的治疗中受到了密切关注，有可能在HCC的免疫治疗中发挥重要作用。但是免疫细胞治疗依然存在着许多问题，缺乏标准化免疫细胞分离培养方案和治疗方案、安全性等问题都是制约免疫细胞治疗向临床转化的瓶颈。如何将免疫细胞治疗与現有的治疗有机结合，如何改善HCC的肿瘤微环境，如何将免疫细胞技术与免疫检查点阻断技术相结合等，是未来HCC免疫细胞治疗的研究方向。
[参考文献]
[1] Bray F，Ferlay J，Soerjomataram I，et al. Global cancer statistics 2018：GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries [J]. CA Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.
[2] Siegel RL，Miller KD，Jemal A. Cancer statistics，2018 [J]. CA Cancer J Clin，2018，68（1）：7-30.
[3] Xie Y，Xiang Y，Sheng J，et al. Immunotherapy for Hepatocellular Carcinoma： Current Advances and Future Expectations [J]. J Immunol Res，2018，2018：8 740 976.
[4] Calderaro J，Rousseau B，Amaddeo G，et al. Programmed death ligand 1 expression in hepatocellular carcinoma： Relationship With clinical and pathological features [J]. Hepatology，2016，64（6）：2038-2046.
[5] Wang WC，Zhang ZQ，Li PP，et al. Anti-tumor activity and mechanism of oligoclonal hepatocellular carcinoma tumor-infiltrating lymphocytes in vivo and in vitro [J]. Cancer Biol Ther，2019，20（9）：1187-1194.
[6] Kawata A，Une Y，Hosokawa M，et al. Adjuvant chemoimmunotherapy for hepatocellular carcinoma patients. Adriamycin，interleukin-2，and lymphokine-activated killer cells versus adriamycin alone [J]. Am J Clin Oncol，1995， 18（3）：257-262.
[7] Haruta I，Yamauchi K，Aruga A，et al. Analytical study of the clinical response to two distinct adoptive immunotherapies for advanced hepatocellular carcinoma：comparison between LAK cell and CTL therapy [J]. J Immunother Emphasis Tumor Immunol，1996，19（3）：218-223.
[8] Chen C，Ma YH，Zhang YT，et al. Effect of dendritic cell-based immunotherapy on hepatocellular carcinoma： A systematic review and meta-analysis [J]. Cytotherapy，2018， 20（8）：975-989.
[9] Alnaggar M，Lin M，Mesmar A，et al. Allogenic Natural Killer Cell Immunotherapy Combined with Irreversible Electroporation for Stage Ⅳ Hepatocellular Carcinoma： Survival Outcome [J]. Cell Physiol Biochem，2018，48（5）：1882-1893.
[10] Siu EH，Chan AW，Chong CC，et al. Treatment of advanced hepatocellular carcinoma： immunotherapy from checkpoint blockade to potential of cellular treatment [J]. Transl Gastroenterol Hepatol，2018，3：89.
[11] Yu SJ，Ma C，Heiich B，et al. Targeting the crosstalk between cytokine-induced killer cells and myeloid-derived suppressor cells in hepatocellular carcinoma [J]. J Hepatol，2019，70（3）：449-457.
[12] Meng Y，Sun J，Wang X，et al. The biological macromolecule Nocardia rubra cell-wall skeleton as an avenue for cell-based immunotherapy [J]. J Cell Physiol，2019.
[13] Zhou Z，Qin H，Weng L，et al. Clinical efficacy of DC-CIK combined with sorafenib in the treatment of advanced hepatocellular carcinoma [J]. J BUON，2019，24（2）：615-621.
[14] Zhang Q，Zhang Z，Peng M，et al. CAR-T cell therapy in gastrointestinal tumors and hepatic carcinoma： From bench to bedside [J]. Oncoimmunology，2016，5（12）：e1 251 539.
[15] Adachi K，Kano Y，Nagai T，et al. IL-7 and CCL19 expression in CAR-T cells improves immune cell infiltration and CAR-T cell survival in the tumor [J]. Nat Biotechnol，2018，36（4）：346-351.
[16] Hu P，Cheng B，He Y，et al. Autophagy suppresses proliferation of HepG2 cells via inhibiting glypican-3/wnt/beta-catenin signaling [J]. Onco Targets Ther，2018，11：193-200.
[17] Jiang Z，Jiang X，Chen S，et al. Anti-GPC3-CAR T Cells Suppress the Growth of Tumor Cells in Patient-Derived Xenografts of Hepatocellular Carcinoma [J]. Front Immunol，2017，7：690.
[18] Liu H，Xu Y，Xiang J，et al. Targeting Alpha-Fetoprotein （AFP）-MHC Complex with CAR T-Cell Therapy for Liver Cancer [J]. Clin Cancer Res，2017，23（2）：478-488.
[19] Wang Y，Chen M，Wu Z，et al. CD133-directed CAR T cells for advanced metastasis malignancies：A phase Ⅰ trial [J]. Oncoimmunology，2018，7（7）：e1 440 169.
[20] Guo X，Jiang H，Shi B，et al. Disruption of PD-1 Enhanced the Anti-tumor Activity of Chimeric Antigen Receptor T Cells Against Hepatocellular Carcinoma [J]. Front Pharmacol，2018，9：1118.
[21] Chen L，Qiao D，Wang J，et al. Cancer immunotherapy with lymphocytes genetically engineered with T cell receptors for solid cancers [J]. Immunol Lett，2019，216：51-62.
[22] Spear TT，Callender GG，Roszkowski JJ，et al. TCR gene-modified T cells can efficiently treat established hepatitis C-associated hepatocellular carcinoma tumors [J]. Cancer Immunol Immunother，2016，65（3）：293-304.
[23] Zhu W，Peng Y，Wang L，et al. Identification of alpha-fetoprotein-specific T-cell receptors for hepatocellular carcinoma immunotherapy [J]. Hepatology，2018，68（2）：574-589.
（收稿日期：2019-09-13 本文編辑：顾家毓）