摘要：目的 对5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549细胞生长的作用方式进行分析探讨，为今后的研究工作提供理论依据。方法 采用不同浓度的5-氟尿嘧啶对体外培养的人肺癌A549细胞进行处理，对5-氟尿嘧啶对A549细胞的抑制率、细胞周期以及细胞凋亡的影响进行分析，并对比分析不同浓度5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞生长的抑制情况。结果 随着药物浓度的增加，5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞的抑制率发生逐渐升高（P<0.05）。结论 5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞生长的抑制存在浓度依赖性，低浓度时会诱导细胞自噬，高浓度时会导致细胞死亡，值得关注。
关键词：5-氟尿嘧啶；人肺腺癌A549细胞；抑制；作用方式；凋亡
5-氟尿嘧啶为临床上常用的一种抗肿瘤化疗药物，研究证实，其能够对肿瘤细胞的生长产生显著的抑制效果，在直肠癌、乳腺癌、消化道癌、绒毛膜上皮癌等诸多恶性肿瘤的治疗中发挥了重要作用[1]。5-氟尿嘧啶属于一种嘧啶类似物，在细胞内科转化成不同的细胞毒性代谢产物，在同DNA、RNA结合后，可对合成进行干扰，进而对肿瘤细胞的生长进行抑制[2]。本次研究中出于对5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549细胞生长的作用方式进行分析探讨的目的，采取不同浓度的5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞进行了处理，并对细胞存活情况进行了对比分析，现汇报如下。
1资料与方法
1.1一般材料 试验材料包括：人肺腺癌A549细胞，胎牛血清，H-DMEM培养基，MTT，0.25%胰蛋白酶，倒置显微镜，酶标仪，流式细胞仪。
1.2方法
1.2.1细胞培养 取人肺腺癌A549细胞在含有1%双抗以及10%胎牛血清的H-DMEM培养基上在5%CO2培养箱中进行培养，温度控制在37℃，3 d后以1∶3的比例传代，取对数生长期细胞展开各项试验。
1.2.2 MTT检测 取上述培养对数期人肺腺癌A549细胞，采取浓度为0.25%的胰酶消化后经H-DMEM培养基对细胞浓度调整至1×105个/mL，接种在96孔微量滴度板，每孔中加入0.2 mL的细胞混悬液，在37℃条件下放置在5%CO2培养箱中进行培养，24 h后每个药物浓度设6个复孔，试验重复操作3次，取平均值。经药物处理后培养48 h，每孔中加入5 mg/mL MTT试剂20 uL，孵育4 h，而后加入200 uL DMSO，震荡处理10 min后，保证结晶充分溶解，经酶标仪对每孔的A值进行测定，计算抑制率，抑制率=[1-（实验组平均A值/对照组平均A值）]×100%。经改良寇式法对各药物的抑制浓度进行计算[3]。
1.2.3流式细胞仪测定细胞周期 将实验细胞分成对照组（不加药）和抑制组，在给药48消失后对细胞进行手机，经胰酶消化后制成单细胞混悬液，计数细胞超过106/ml，经PBS洗涤后离心处理，加入2 mL 4℃预冷的浓度为70%的无水乙醇，固定4 h以上，离心处理将乙醇去除，加入DNA染色剂，加入200 uL的TritonX-100，避光孵育15 min后上机检测。
1.2.4流式细胞仪测定细胞凋亡 实验分组与给药剂量与1.2.3相同，在给药后48 h对细胞进行收集，经胰酶消化后制成单细胞混悬液，计数细胞超过106/mL，经PBS洗涤后离心处理，加入抗体后避光孵育15 min，加入200 uL的Buffer液后进行检测。
1.3数据处理 研究中相关数据资料采用SPSS 18.0统计学软件处理，对比中计量资料的对比采取t检验，计数资料的对比则是采取χ2检验，在P<0.05时，视为差异存在统计学意义。
2结果
2.1 5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞的抑制作用 经对比发现，随着浓度的升高，5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞的抑制率呈现逐渐升高的趋势（P<0.05），见表1。
2.2 5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞周期的影响 经统计发现，对照组与给药组细胞周期存在明显差异（P<0.05），见表2。
2.3 5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响 对照组早期凋亡率为（0.42±0.11）%，晚期凋亡率为（1.86±0.22）%，5-氟尿嘧啶组早期凋亡率为（6.38±0.35）%，晚期凋亡率为（8.72±0.31）%，显然5-氟尿嘧啶组细胞凋亡率较对照组发生显著升高（P<0.05）。
3讨论
5-氟尿嘧啶属于嘧啶拮抗剂，其为临床上比较常用的一种对晚期实体瘤进行化疗的药物，经临床实践发现，各种瘤细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性对化疗效果产生了一定程度的影响。5-氟尿嘧啶通过对核酸的合成进行干扰而达到一致肿瘤细胞增生的效果[4]。本次研究中出于对5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549细胞生长的作用方式进行分析探讨的目的，采用不同浓度的5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞进行了处理，统计结果发现，5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞存在明显的抑制作用，且抑制率随着给药浓度的增加而呈现逐渐升高的趋势；5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞周期具有一定程度的影响，表现为5-氟尿嘧啶作用48小时后会将细胞阻滞在S期，G2期无细胞，G1期有少量细胞；5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞凋亡会产生显著影响，表现为增加细胞早期和晚期凋亡率。这一结果与相关文献报道结果一致，充分证实了5-氟尿嘧啶对人肺腺癌A549细胞生长的抑制存在浓度依赖性，低浓度时会诱导细胞自噬，高浓度时会导致细胞死亡，值得关注。
参考文献：
[1]李文新.肺癌标志物的研究现状与临床应用评价[J].内蒙古医学杂志，2010，42（11）：1329-1331.
[2]盛雅萍，郭伟健.5-氟尿嘧啶耐药机制及其治疗[J].国际肿瘤学杂志，2012，33（07）：502-505.
[3]张德海，张晴，张翠允，等.5-FU 对肺癌细胞生长抑制作用机制研究[J].滨洲医学院学报，2009，32（94）：259-261.
[4]杨树栋，廖园莉，何胜东.Prohibitin 对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响[J].现代生物医学进展，2010，10（15）：2859-2861. 编辑/肖慧