对照，在波长335 nm处测定吸光度值，3次重复，取平均值[1-2，5-8]。以吸光度A为纵坐标，硒标准溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.2.3 样品的处理。珍珠花生样品用混酸消化，将有机硒转化成无机硒，在酸性条件下，Se（Ⅳ）与邻苯二胺反应，产物在波长335 nm处有最大吸收峰，而邻苯二胺本身在此并无最大吸收。准确称取1.012 0、1.024 0、1.031 1 g花生样品分别置于3个锥形瓶中。用20 mL混酸冷消化（V■∶V■=2∶1）过夜，翌日加热至溶液清澈透明，冷却，转入100 mL容量瓶，定容备用[2，9-11]。
1.2.4 样品的测定。取待测液2.0 mL于分液漏斗中。依次加25.0 mL水、2.0 mL 5% EDTA、用0.1 mol/L HCl溶液和氨水调pH值至2.0加2.0 mL 1%邻苯二胺，振荡，静置120 min，加10.0 mL甲苯并充分振荡，静置20 min，取甲苯层，以不含硒标准品的甲苯溶液作空白对照，在波长335 nm处测定吸光度值[12-16]，3次重复，取平均值。根据标准曲线方程计算出样品中硒的含量[1-2]。
2 结果与分析
2.1 硒含量标准曲线的绘制
由图1可知，吸光度与硒浓度具有良好的线性关系，回归方程为y=0.059 5x-0.051 9（R2=0.982 2）。
2.2 最佳测试条件的选择
2.2.1 混酸用量的选择。准确称取1.024 1、1.024 0、1.021 1、1.012 5、1.011 3 g花生样品于5个锥形瓶中，分别加入10.0、15.0、20.0、25.0、30.0 mL混酸，结果如表1所示，可见 20.0 mL消化液可彻底消化样品。消化液使用过量，则硒Se（Ⅳ）会被氧化为Se（Ⅵ），从而造成测定结果的偏差。消化液使用不足，则样品消化不彻底，不能把花生中的Se（Ⅱ）彻底氧化为Se（Ⅳ）[1-2]。
2.2.2 邻苯二胺用量。准确称取1.024 1 g花生样品经消化后，分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL邻苯二胺进行络合，结果如表1所示。可知，加入2.5 mL 1%邻苯二胺盐酸盐溶液反应已经络合完全[1-2]。该物质在紫外区有一个特殊的最大吸收峰，而邻苯二胺本身并没有此特殊最大吸收峰。邻苯二胺过量对吸光度没有太大影响[1-5]；邻苯二胺的量不足，会导致Se（Ⅳ）不能完全络合，相应的吸光度小。
2.2.3 EDTA用量的影响。准确称取1 g花生样品经消化后，分别加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL EDTA进行络合，结果如表1所示。可知，2.0 mL EDTA已经能够排除其他元素如Fe、Cu、Co的干扰。从标准硒溶液吸光度与EDTA用量的关系可知，随着EDTA用量的增加，吸光度逐渐减小。这是因为反应体系为酸性条件，一定程度上影响了EDTA的溶解度，导致出现部分白色沉淀，萃取时白色沉淀悬浮在甲苯和水相之间[1-2]，分析结果受到影响。
2.3 样品测定
样品1、样品2、样品3的硒平均含量分别为20.31、20.82、20.48 μg/g，可见花生中Se的平均含量为20.54 μg/g。该试验算出的相对标准偏差为0.73%。硒样品中加入标准硒的回收率在96.5%～98.1%之间，平均为97.4%，相对标准偏差为0.75%，回收效果较理想。近年来，杨光圻提出了硒的每人每日安全摄入量为400 μg。也就是说，如果要以铜仁花生补硒，则花生的每日进食量不得超过20 g。
3 结论与讨论
综上所述，花生中Se的平均含量为20.54 μg/g。根据试验所得数据算出相对标准偏差为0.73%。硒样品中加入标准硒的回收率在96.5%～98.1%之间，平均为97.4%，相对标准偏差为0.75%，有较好的回收效果[1]。说明本分析方法可行、准确。
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