材料与方法
1.1 材料与仪器
果蔬样品：采用四分法取适量样品，用食品加工机将样品粉碎，装入保鲜盒中，于-18 ℃冰柜中保存，备用;氨基甲酸酯类农药标准品储备液（100 μg/mL）：多菌灵、啶虫脒、克百威、甲萘威、嘧霉胺、苯醚甲环唑、哒螨灵、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（甲维盐）、咪鲜胺、烯酰吗啉、嘧菌酯、涕灭威亚砜均购于天津环保所;甲醇、乙酸铵为色谱级（JetBaker）;乙腈，甲酸为色谱级（Fisher）;试验用水为娃哈哈纯净水;0.22 μm有机滤膜（津腾）;Bond Elut EN萃取盐包（内含4 g MgSO4、1 g NaCl，1 g柠檬酸氢钠及0.5 g柠檬酸氢二钠）和15 mL净化管（内含885 mg MgSO4、150 mg PSA及15 mg GCB）均购自美国Agilent公司。
1.2 仪器与设备
Agilent 1260超高效液相色谱系统，包括四元泵，在线真空脱气机，柱温箱，自动进样器（安捷伦公司）;API3200质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）（美国AB公司）;食品加工机（上海博朗）;CP4102电子天平（上海奥豪斯）;超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;5810R低温冷冻离心机（美国Eppendorf公司）;MS3涡旋混匀器（德国IKA公司）。
1.3 方法
1.3.1 标准溶液的配制 分别取400 μL 100 μg/mL的12种标准溶液加入到10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀，配制成4 μg/mL的混合标准中间液，-18 ℃避光保存。混合标准工作液根据需要用甲醇配制。
1.3.2 样品制备 准确称取10.0 g粗粉碎的蔬菜样品置于50 mL离心管中，加10 mL乙腈和陶瓷均质子，涡旋振荡1 min，加入Bond Elut EN萃取盐包，涡旋振荡1 min，8 000 r/min离心5 min，取6 mL乙腈上清液加入到含有净化吸附剂和硫酸镁的15 mL净化管中，涡旋振荡1 min，8 000 r/min离心5 min。准确吸取1 mL上清液过0.22 μm有机滤膜，待HPLC-MS/MS分析。
1.3.3 仪器条件
1）色谱条件。色谱柱：ZOBRAX EclipseXDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）;流动相：A为5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸），B为甲醇;梯度洗脱程序：0～6 min，90% A→10% A;6～10 min，10% A;10～10.01 min，10% A→90% A;10.01～13 min，90% A。流速1 mL/min;进样量5 μL;柱温40 ℃。
2）质谱条件。电喷雾离子源（ESI）;正离子扫描;多反应监测（MRM）;毛细管电压：5 500 V;干燥气温度500 ℃;Gas1：60 mL/min;Gas2：65 mL/min。
2 结果与分析
2.1 质谱条件优化
采用电喷雾离子源，在正离子模式下分别对0.5 μg/mL的12种氨基甲酸酯类标准溶液进行母离子全扫描，确定其分子离子。再分别以以上离子作为母离子进行子离子扫描，筛选响应值较高、干扰较小、稳定的两个离子作为子离子，峰形较高的离子作为定量离子，并优化DP和CE。各目標化合物优化质谱条件见表1。
2.2 色谱条件优化
采用梯度洗脱能较好地分离12种目标化合物，总离子流见图1。通过在流动相中加入适量的甲酸和乙酸铵，不但可以增加分离度，改善峰形，而且可以使氨基甲酸酯类农药在ESI正离子模式的质谱信号得到增强，提高检测灵敏度。梯度洗脱条件的优化：经过反复试验，改变不同时间段流动相中有机相和水相的比例，最终确定了最佳梯度洗脱程序：0～6 min，10%甲醇→90%甲醇;6～10 min，90%甲醇;10～10.01 min，90%甲醇→10%甲醇;10.01～13 min，10%甲醇。
2.3 样品前处理方法的选择
以未检出农药残留的蔬菜为基质，添加0.05 mg/kg氨基甲酸酯类混合标准农药，分别采用NY/T 761-2008[17]中氨基甲酸酯类农药多残留测定的前处理方法和QuEchERs前处理方法进行加标回收试验，两种方法处理后12种农药的回收率见表2。其中回收率100%，表示样品中所含农药在检测过程中无损失，结果越接近100%，则前处理方法越好。结果表明，QuEchERs前处理方法简单、快捷、安全，除多菌灵、嘧霉胺和涕灭威亚砜回收率与761方法接近，其他9种农药的回收率均优于761方法，且QuEchERs方法所得回收率的相对标准偏差均低于761方法，平行性更好，可作为测定12种氨基甲酸酯类农药残留测定的前处理方法。
2.4 标准曲线和检出限
将混合标准贮备液分别稀释成不同浓度的标准液，按上述操作条件进行测定，以浓度对相应的峰面积进行线性回归，获得氨基甲酸酯类农药的标准曲线及相关系数。12种农药的线性范围、线性方程和相关系数见表3。标准曲线在线性范围内呈良好的线性关系，线性相关系数为0.996 6～0.999 9，线性范围为5～100 μg/L，使用该仪器的方法检出限为0.1 μg/kg，表明该方法可对氨基甲酸酯类农药进行准确定性、定量分析。
2.5 回收率和精确度
取10.0 g未检出农药残留的蔬菜为空白样品，在线性范围内分别添加高、中、低3个浓度的标准氨基甲酸酯类农药按“1.3”方法提取后进行回收率试验。每个添加浓度重复3次，结果见表4。由表4可以看出，方法回收率为80%～127%，标准偏差为1.1%～10.2%，满足农药多残留分析的要求。
2.6 实际样品的测定
按照上述方法，分别对120份果蔬样品进行氨基甲酸酯类农药残留检测，结果烯酰吗啉超标样品2个，合格率为98.33%。
3 小结与讨论
试验建立了分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定果蔬中12种氨基甲酸酯类农药残留的快速检测方法。与传统761方法相比，样品前处理过程简单，试剂消耗量少，前处理时间短，样品分析成本低，在实际大量检测样品中有较强的可行性和实用性。GB2763-2016《食品安全国家标准-食品中农药最大残留限量》标准中12种氨基甲酸酯类农药的最大残留限量的最低值为0.01～1.00 mg/kg，本试验中12种农药的定量限均为0.005 mg/kg，满足果蔬样品中氨基甲酸酯类农药残留的监测要求。
参考文献：
[1] 翟德业，魏善明，周 围，等.蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留的固相微萃取分离和HPLC法检测[J].应用化学，2009，26（4）：498-500.
[2] 陈笑梅，胡贝贝，刘海山.高效液相色谱-串联质谱法测定粮谷中9种氨基甲酸酯类农药残留[J].分析化学，2007，35（1）：106-110.
[3] 庞国芳，方晓明，余建新，等.农药兽药残留现代分析技术[M].北京：科学出版社，2007.198-212.
[4] 达 晶，王钢力，曹 进，等.QuEchERs-液相色谱串联质谱法测定植物性食品中30种氨基甲酸酯类农药残留[J].色谱，2015， 33（8）：830-837.
[5] 邵金良，黎其万，刘宏程，等.高效液相色谱法测定蔬菜中8种氨基甲酸酯类农药残留[J].现代食品科技，2011，27（7）：856-860.
[6] 王连珠，周 煜，黄小燕，等.基于QuEChERS提取方法优化的液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中51种氨基甲酸酯类农药残留[J].色谱，2013，31（12）：1167-1175.
[7] 王云凤，刘友序，左 峰，等.应用QuEChERS和液相色谱-串联质谱技术检测食品中21种氨基甲酸酯类农药残留[J].分析试验室，2010，29（增刊）：281-284.
[8] 马合勤，岑嘉茵.超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中4种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留[J].现代农药，2019，18（1）：37-40.
[9] 苏建峰，卢声宇，陈 晶，等.溶剂转移-气相色谱-质谱法和选择洗脱-气相色谱法测定大蒜中289种农药多残留[J].色谱，2011， 9（7）：643-655.
[10] 谭阳阳，牛 墨，田 红.固相萃取-气相色谱质谱联用法测定蔬菜和食用菌中6种氨基甲酸酯类农药残留[J].检验检疫学刊，2017，27（6）：10-13.
[11] WANG J，WILLIS C，DANIELL D.Applications of LC/ESI-MS/MS and UHPLC Qq-TOF-MS for the determination of 141 pesticides in tea[J].Journal of AOAC international，2010，396（4）：1513-1538.
[12] 李崇瑛，白亚之，钮松召，等.食品中氨基甲酸酯农药残留的分析方法[J].分析科学学报，2007，23（6）：723-728.
[13] 邓立刚，李增梅，郭长英，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药残留[J].食品科学，2011，32（6）：221-224.
[14] 周 霞，陈万勤，陈晶燕，等.QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定春笋中4种农药残留[J].中国食品卫生杂志，2018， 30（5）：486-490.
[15] 蓝梦哲，林 绪，刘雅琼，等.液相色谱-串联质谱法同时测定8 种花草茶中77种農药残留[J].色谱，2018，36（9）：938-945.
[16] NY/T 761-2008，蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S].
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